Imunohistochemický screening rakoviny děložního čípku v biopsiích nádoru (p16INK4a + Ki-67)

Imunohistochemické metody v diagnostice onkologických onemocnění

Hodnocení exprese p16INK4a + Ki-67 – studium dvou markerů pro časnou diagnostiku dysplazie s vysokým rizikem malignity: p16INK4a + Ki-67 (použití monoklonálních protilátek proti p16INK4a + Ki-67) – test sloužící k detekovat protein p16INK4a, který je nepřímým markerem onkogenní exprese HPV s vysokým onkologickým rizikem u dysplazie a rakoviny děložního čípku, a protein Ki-67 pro stanovení indexu proliferace nádorových buněk. Rakovina děložního čípku je jedním z nejdůležitějších lékařských problémů, protože zhoubný nádor je často detekován v pozdních stádiích, což vede k úmrtí a invaliditě pacientek. Předpokládá se, že příčinou vývoje děložního čípku jsou vysoce onkogenní lidské papilomaviry.

Lidský papilomavirus – podíl na vzniku rakoviny děložního čípku

Bylo zjištěno, že HPV viry s vysokým karcinogenním rizikem (16, 18, 31,33, 35, 39,45, 51, 52, 56, 58,59, 66, 68) se nacházejí v nádorových buňkách u karcinomu děložního hrdla v 93 % případů. Nashromážděné vědecké důkazy naznačují, že porušení buněčného dělení po infekci HPV se může vyvinout po průchodu určitými stádii. Nejprve se virus HPV integruje do genomu lidské buňky. Dále jsou v hostitelské buňce produkovány proteiny E6 a E7 viru HPV, které ovlivňují proteiny regulující dělení lidských buněk, zejména protein pRb. Protein E7 inaktivuje expresi proteinu pRb. Tento protein zase ovlivňuje produkci proteinu p16ink4a, který reguluje buněčné dělení. Zvýšení množství onkoproteinů E6 a E7 prostřednictvím inaktivačního účinku proteinu E7 tedy přispívá ke zvýšení exprese proteinu p16ink4a. V konečném důsledku to vede k narušení cyklů buněčného dělení. Detekce zvýšeného množství proteinu p16ink4a imunohistochemickou metodou slouží k potvrzení faktu dysplazie (prekancerózní stav) a další nádorové transformace buněk způsobené lidským papilomavirem. Dysplazie cervikálních buněk může být způsobena buď virovým agens, nebo jinými zánětlivými onemocněními. Řada studií ukázala, že bez dysplazie není exprese proteinu p16ink4a detekována.

Onkoproteiny — markery transformace nádorových buněk

Četnost detekce proteinu p16ink4a se zvyšuje se zvyšující se závažností cervikální dysplazie. Přítomnost tohoto proteinu je nepřímým markerem integrace HPV do genomu lidské buňky a ukazuje na vysoké riziko rozvoje rakoviny děložního čípku. Ki-67 je protein buněčného jádra spojený se syntézou ribozomální RNA. Inhibice práce tohoto proteinu vede k narušení syntézy ribozomální RNA. Jeho definice se používá jako marker proliferační aktivity nádorové buňky. Ki-67 se nachází ve všech fázích cyklu buněčného dělení kromě G0. Tento parametr se odhaduje v procentech a ukazuje, kolik procent nádorových buněk se aktivně dělí, tzn. ve skutečnosti udává rychlost dělení nádorových buněk. Podle počtu buněk, ve kterých je nalezena exprese Ki-67 vyjádřená v procentech, lze posoudit stupeň agrese maligních buněk. Čím vyšší procento (v poměru 10-15 %), tím pesimističtější je předpověď.

Hlavní indikace pro předepisování

Identifikace dysplazie se zvýšeným rizikem vzniku nádoru pro včasnou diagnostiku rakoviny děložního čípku a jmenování léčby prekancerózních procesů; stanovení další taktiky léčby nádoru.